Сетевое издание "Медицина и образование в Сибири"
 
 
  

 
№ 3 - 2014 г.
14.00.00 медицинские науки

УДК 612.313.5:612.6.054+612.018.2]-092.9

МОРФОЛОГИЧЕСКИЕ ИЗМЕНЕНИЯ ПРЕЛИМФАТИКСОВ ПОДНИЖНЕЧЕЛЮСТНОЙ СЛЮННОЙ ЖЕЛЕЗЫ КРЫС ПРИ ПЕРЕВИВНОЙ ОПУХОЛИ И ВОЗДЕЙСТВИИ МЕЛАТОНИНА

А. О. Кулишенко, А. С. Виноградов, Г. А. Асеев, Е. В. Овсянко, М. Г. Пустоветова, И. П. Жураковский, А. Н. Машак, Я. У. Овсянко, Н. В. Беляева

ГБОУ ВПО «Новосибирский государственный медицинский университет» Минздрава России (г. Новосибирск)

В исследовании использовали крыс-самцов линии Wistar массой 180–200 г. Суспензию клеток карциносаркомы Walker 256 (W256) имплантировали в мышцу бедра крыс. Крысы были случайным образом разделены на 4 группы (n = 7): 1-я группа — интактная; 2-я группа — без карциносаркомы W256 и при воздействии мелатонином (Mt); 3-я — с карциносаркомой W256 без лечения; 4-я — с карциносаркомой W256 при воздействии Mt (WMt). Mt в дозе 10 мг/кг внутрибрюшинно вводили в течение 14-ти суток. Изучали площадь внутри- и междольковых пространств, паренхимы слюнной железы, а также уровень экспрессии VEGF-A поднижнечелюстной слюнной железы. Опухолевый рост оказывает негативное влияние на ткань слюнной железы: токсические продукты метаболизма и распада опухолевых клеток способствуют изменению проницаемости кровеносных сосудов, что ведет к гемо- и плазморрагиям, в результате происходит увеличение площади внутридольковых пространств на фоне прогрессирующей паранеопластической эндогенной интоксикации. Мелатонин оказывает лимфотропный эффект, выражающийся в стремлении возврата показателей площади как внутридольковых, так и междольковых пространств при опухолевом росте к соответствующим показателям нормы.

Ключевые слова: поднижнечелюстная слюнная железа, VEGF-A, мелатонин, карциносаркома Walker 256.


Введение. Мелатонин синтезируется не только шишковидной железой, но и во многих других органах и тканях организма, в частности, лимфатической системе. Это — костный мозг, тимус и лимфоциты. Мелатонин обладает иммуномодулирующими функциями. Мелатонин участвует в регуляции как клеточного, так и гуморального иммунитета, стимулирует выработку естественных клеток-киллеров, моноцитов и лейкоцитов, увеличивает выработку интерлейкинов IL-2, IL-6, IL-12 и интерферона-гамма [7].

Гормон мелатонин влияет на здоровье органов полости рта через мембранные рецепторы, представленные в слизистой эпителия полости рта и слюнных железах. Недавние исследования показали, что мембранные рецепторы мелатонина присутствуют в слюнных железах как крыс, так и человека [8]. Известно, что в любой патологический процесс вовлекаются структуры лимфатической системы [1]. Однако нет достаточных исследований, демонстрирующих структурные преобразования интерстициальных пространств — «корней» лимфатической системы — в слюнных железах в норме и при канцерогенезе при влиянии мелатонина.

На фоне роста числа онкологических заболеваний идет активный поиск новых препаратов для терапии пациентов. Использование мелатонина в последнее время становится особенно привлекательным, так как этот препарат, не оказывая токсического действия на организм, снижает токсическое воздействие, оказываемое как лучевой, так и химиотерапией, и при этом не снижает их терапевтической эффективности.

Цель исследования: изучить динамику морфологических изменений тканевого звена лимфатического региона поднижнечелюстной слюнной железы крыс с карциносаркомой Walker 256 (W256) и при воздействии мелатонина (Mt).

Материалы и методы. В исследовании использовали крыс-самцов линии Wistar массой 180–200 г. Работу с животными проводили в соответствии с Европейской конвенцией и директивами по охране позвоночных животных и директивами по охране позвоночных животных, используемых в эксперименте [3, 6]. Использовали перевиваемый штамм карциносаркомы W256, поддерживаемый invivo (лаборатория физиологической генетики Института цитологии и генетики СО РАН, Новосибирск). Суспензию клеток W256 имплантировали в мышцу бедра крыс линии Wistar в объеме 1 × 106 клеток [4]. Крысы были случайным образом разделены на 4 группы (n = 7): 1-я группа — интактная; 2-я группа — без карциносаркомы W256 и при воздействии мелатонином (Mt); 3-я — с карциносаркомой W256 без лечения; 4-я — с карциносаркомой W256 при воздействии мелатонином (WMt). Mt (ICN Biomedicals Inc. USA) в дозе 10 мг/кг вводили внутрибрюшинно в течение 14-ти суток. Объем опухоли измеряли штангенциркулем в трех взаимно перпендикулярных направлениях. Все манипуляции совершались спустя 5 суток с момента перевивки опухоли. Поднижнечелюстную слюнную железу для исследования в группе с W256 забирали на 5, 7 и 14-е сутки; в группе с W256 при лечении MТ на 10, 12 и 19-е сутки (рис. 1).

Рис. 1. Внутридольковые пространства поднижнечелюстной слюнной железы при карциносакркоме W256 без лечения и при воздействии Mt: ИН — интактные животные; W256 — крысы с перевивной карциносаркомой W256 без лечения; WМt — с карциносаркомой W256 при воздействии мелатонином. Препараты докрашены гематоксилином Майера, × 400

Материал фиксировали в 10 % формалине, затем обезвоживали в серии спиртов с возрастающей концентрацией и заключали в парафин-воск. Для изучения площади внутри- и междольковых пространств, площади паренхимы слюнной железы препараты окрашивали гематоксилином Майера и эозином [2]. Иммуногистохимическое исследование уровня экспрессии фактора эндотелия роста сосудов (VEGF-A) выполняли на парафиновых срезах с помощью непрямого стрептавидин-авидинового метода [5]. Для выявления VEGFa в качестве первичных использовали поликлональные кроличьи антитела (Lab Vision Corporation, USA) в разведении 1 : 100. Срезы докрашивали гематоксилином Майера и эозином. О специфическом связывании антител свидетельствовало выявляемое дисперсное мелкогранулярное окрашивание цитоплазмы клеток — от бледно-желтого до темно-коричневого цвета. Более интенсивное окрашивание соответствовало наиболее высокому содержанию антигенов в клетках.

Рис. 2. Иммуногистохимия VEGF-A в ткани поднижнечелюстной слюнной железы при карциносакркоме W256 без лечения и при воздействии мелатонином: ИН — интактные животные; W256 — крысы с перевивной карциносаркомой W256 без лечения; WМt — с карциносаркомой W256 при воздействии Мt. Препараты докрашены гематоксилином Майера, × 400

Морфометрическое исследование проводили на фотографических снимках при помощи микроскопа Micros MC 300A (Austria) и камерой CX 13c (Baumer) с конечным увеличением ×600 и программным обеспечением ImageJ 1.42g (National Institute of Health, USA). Использовали программное обеспечение SPSS, версия 11.5.0 (SPSS, Inc., Chicago, USA) для обработки данных и статистического анализа.

Результаты исследований и обсуждение. В ходе анализа было выявлено снижение относительной площади паренхимы слюнной железы во всех изучаемых группах. Однако, если в группах с Mt как без опухоли, так и в большей степени с опухолевым ростом снижение было незначительно по сравнению с интактным уровнем, то в группе с опухолью без лечения Мt данный показатель резко снижался на протяжении всего эксперимента (см. табл.).

Величины морфологических показателей поднижнечелюстной слюнной железы (М ± m)

Показатели, мкм² Группы
ИН Mt W256 WMt
Сутки
5 7 14 5 7 14 10 12 19
Паренхима 98,89 ± 0,11 98,7 ± 0,09 98,51 ± 0,13 98,53 ± 0,12 97,54 ± 0,17* 97,08 ± 0,19* 96,6 ± 0,24* 98,35 ± 0,18* 98,2 ± 0,22* 97,96 ± 0,31*
Внутридольковые пространства 3,08 ± 0,18 2,73 ± 0,25 3,98 ± 0,27* 3,4 ± 0,23 4,82 ± 0,35* 6,55 ± 0,41* 8,18 ± 0,43* 4,37 ± 0,36* 4,90 ± 0,29* 5,68 ± 0,43*
Междольковые пространства 1,1 ± 0,11 1,29 ± 0,93 1,48 ± 0,13* 1,46 ± 0,12* 2,45 ± 0,17* 2,91 ± 0,19* 3,35 ± 0,24* 1,64 ± 0,18* 1,77 ± 0,23* 2,03 ± 0,31*

Примечание: ИН — интактные животные; Mt — без карциносаркомы W256 при воздействии Мt; W256 — крысы с перевивной карциносаркомой W256 без лечения; WМt — с карциносаркомой W256 при воздействии Мt; * — достоверное отличие с соответствующими показателями интакных крыс при Р ≤ 0,05

При определении относительной площади внутри- и междольковых пространств мы наблюдали противоположную гистологическую картину. В группе с опухолью без лечения величины этих показателей, занимаемой ими площади, резко возрастали и особенно к концу эксперимента по сравнению со всеми изучаемыми группами.

Корреляционный анализ выявил умеренную положительную связь в группе с карциносаркомой W256 без лечения (r = 0,671) между величиной показателя относительной площади внутридольковых пространств и относительной площадью, занимаемой фактором эндотелия роста сосудов и его содержанием (r = 0,671; r = 0,518). Выявленные взаимосвязи позволяют считать, что изменение уровня экспрессии фактора эндотелия роста сосудов будет влиять на площадь внутридольковых пространств.

Выводы

  1. Опухолевый рост оказывает негативное влияние на ткань поднижнечелюстной слюнной железы: токсические продукты метаболизма и распада опухолевых клеток способствуют изменению проницаемости кровеносных сосудов, что ведет к гемо- и плазморрагиям, в результате происходит увеличение площади внутридольковых пространств на фоне прогрессирующей паранеопластической эндогенной интоксикации.
  2. Мелатонин оказывает лимфотропный эффект, выражающийся в стремлении возврата показателей площади как внутридольковых, так и междольковых пространств при опухолевом росте к соответствующим показателям нормы.

Список литературы

  1. Бородин Ю. И. Регионарный лимфатический дренаж и лимфодетоксикация / Ю. И. Бородин // Морфология : научно-теоретический мед. журн. — 2005. — Т. 127, № 4. — С. 25–28.
  2. Основы гистологии и гистологической техники / В. Г. Елисеев, М. Я. Субботин, Ю. И. Афанасьев, Е. Ф. Котовский. — М. : «Медицина», 1972. — 268 с.
  3. Руководящие принципы ухода за животными и их использования в эксперименте // Журн. высш. нервной деятельности им. И.П. Павлова. — 1990. — № 1. — С. 203.
  4. Динамика опухолевого роста у крыс линии Brattleboro и Wag при введении разных доз карциносаркомы Walker 256 / И. И. Хегай, Н. А. Попова, Л. С. Ганилова [и др.] // Бюл. эксперим. биологии и медицины. — 2008. — Т. 145, № 1. — С. 88–90.
  5. Эллиниди В. Н. Практическая иммуногистохимия / В. Н. Эллиниди, Н. В. Аникиева, Н. А. Максимова. — СПб., 2002.
  6. Counsil Directive of 24 November 1986 on the Approximation of Laws, Regulations o1f the Member States Regarding the Protection of Animals Used for Experimental and Other Purposes Directive (86/609/ЕЕС) // Official Journal of the European Communities. — L 262. — P. 1–29.
  7. Nuclear receptors are involved in the enhanced IL-6 production by melatonin in U937 cells / J. M. Guerrero, D. Pozo, S. Garcia-Maurino [et al.] // Biol. Signals Recept. — 2000. — P. 197–202.
  8. Localization and biological activities of melatonin in intact and diseased gastrointestinal tract (GIT) / S. J. Konturek, P. C. Konturek, I. Brzozowska [et al.] // J. Physiol. Pharmacol. — 2007. — Vol. 58. — Р. 381–405.

 

Учредитель: Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования «Новосибирский государственный медицинский университет» Министерства здравоохранения Российской Федерации (ФГБОУ ВО НГМУ Минздрава России)

Государственная лицензия ФГБОУ ВО НГМУ Минздрава России
на образовательную деятельность:
серия ААА № 001052 (регистрационный № 1029) от 29 марта 2011 года,
выдана Федеральной службой по надзору в сфере образования и науки бессрочно

Свидетельство о государственной аккредитации ФГБОУ ВО НГМУ Минздрава России:
серия 90А01 № 0000997 (регистрационный № 935) от 31 марта 2014 года
выдано Федеральной службой по надзору в сфере образования и науки
на срок по 31 марта 2020 года

Адрес редакции: 630091, г. Новосибирск, Красный проспект, д. 52
тел./факс: (383) 229-10-82, адрес электронной почты: mos@ngmu.ru

Выпуск сетевого издания «Медицина и образование в Сибири» (ISSN 1995-0020)
прекращен в связи с перерегистрацией в печатное издание «Journal of Siberian Medical Sciences» (ISSN 2542-1174). Периодичность выпуска — 4 раза в год.

Архивы выпусков «Медицина и образование в Сибири» доступны на сайте с 2006 по 2016 годы, а также размещены в БД РИНЦ (Российский индекс научного цитирования) на сайте elibrary.ru.

Средство массовой информации зарегистрировано Федеральной службой по надзору в сфере связи, информационных технологий и массовых коммуникаций (Роскомнадзор) —
Свидетельство о регистрации СМИ: ПИ № ФС77-72398 от 28.02.2018.

© ФГБОУ ВО НГМУ Минздрава России, 2020



22.05.2017
Сетевое издание «Медицина и образование в Сибири» преобразовано в печатное издание «Journal of Siberian Medical Sciences». Дата перерегистрации: 18.05.2017. Свидетельство о СМИ: ПИ № ФС 77-69793.
Подробнее >>

03.04.2017
С 2017 года Издательско-полиграфическим центром НГМУ осуществляется выпуск печатного издания «Сибирский медицинский вестник».
Подробнее >>

08.02.2016
Уважаемые авторы! Открыт прием статей во 2-й номер 2016 года (выход номера — середина мая 2016 г.).
Подробнее >>

11.01.2016
Уважаемые авторы! Продолжается прием статей в 1-й номер 2016 года (выход номера — конец февраля 2016 г.).
Подробнее >>

28.12.2015
Уважаемые авторы! Сетевое издание входило в Перечень ВАК до 30 ноября 2015 г. Работа по включению издания в новый Перечень ВАК продолжается.
Информация о формировании Перечня ВАК
Подробнее >>

Архив новостей


Rambler's Top100